在鉴别真假祖母绿时，我们可以通过祖母绿的特性来区分与其相似的物体，如萤石、绿碧玺、磷灰石、绿色蓝宝石、含铬钒的钙铝榴石、绿色橄榄石、绿色石榴石、绿色玻璃以及人工合成祖母绿等。
首先可以使用切尔西滤色镜观察，呈红色者是祖母绿，呈绿色者则是其他天然宝石；其次，祖母绿的折光率较低，没有折光现象，而像绿色钻石之类的宝石具有耀眼的金属光泽；再次，用放大镜观察内部，天然祖母绿一般都有固体、液体、气体三者混合在一起的包裹体，而人造的多为气体或气液相混的包裹体，常呈烟云或羽状。人造祖母绿的比重和折光率一般都偏低。如磷灰石，虽然有浅绿的颜色，但是其硬度较小，折光率则较大，而且在紫外线下发磷光，这些都与祖母绿的特性有很大差别。而翠榴石则色泽较淡，经常带有黄色色调，天然祖母绿虽然经常发暗，但黄色色调并不重。
天然祖母绿内部颜色多不一致，绿色调有起伏，结晶中瑕疵较多，色调灰暗者较多；优化处理或染色的祖母绿才会如一块平板那么缺乏变化，色彩鲜艳而明丽。
天然祖母绿与YAG（钇铝榴石）、绿色玻璃的区分就在于：首先，天然祖母绿大多会有瑕疵及裂纹，其瑕疵多呈“棉絮”状，有时还可见一些黑色的矿物包裹体等杂质。而人造钇铝榴石的内部一般洁净，偶有气泡。其次，祖母绿可见二色性，许多天然宝石不只是折射进入它的光线，同时也会折射出两束速度和极性有微小偏差的光线，称为双折射性，许多有色宝石包括祖母绿、红宝石等都具有该特质。只是人造钆铝榴石的折射率较大，而祖母绿在1.575至1.583能直接测出。双折射性的宝石会产生漂亮而有趣的视觉，这也是为什么有些祖母绿看起来带有微蓝或微黄的色调，有些红宝石会带有微紫和微橘红的色调的原因。
绿色人造玻璃与祖母绿最为相似，无论是从颜色还是外观上均可达到乱真的程度。人造玻璃中的气泡或其他一些残余物质，可以营造出一种类似裂隙或指纹状包裹体的外观，但人造玻璃缺少祖母绿那种绿绒绒的感觉。对祖母绿比较熟悉的人，在对样品的第一眼观察上就会产生是不是玻璃的怀疑，但一些黄绿色或蓝绿色的祖母绿，色泽较浅时，绿绒绒的感觉欠强，不容易与人造玻璃区别。
如何区分天然祖母绿与合成祖母绿呢？首先，天然祖母绿的折光率一般在1.57至1.59之间，而合成祖母绿往往折光率较低，一般小于1.57，但有例外的情况。其次，天然祖母绿的比重较大，一般大于2.7，而熔融法合成的祖母绿，比重只有2.65至2.66左右。但要注意的是，水热合成的祖母绿也有比重较高的。
再次，天然祖母绿大多会有瑕疵及三相包裹体，针状、柱状、粒状的结晶矿物包裹体等，合成的祖母绿则往往比较干净，水热法合成的祖母绿包裹体呈“窗纱状”，熔融法合成的祖母绿的包裹体呈面包屑状。最后，天然祖母绿在紫外线下反应比较迟钝，或呈暗红色，而合成祖母绿则往往发强红色荧光。做此项测试时一般应与标准样进行对照。
此外，拼合宝石的形式很多，可有二层或三层拼合，最常见的有祖母绿加绿柱石、祖母绿或绿柱石加绿色人造玻璃、红色石榴石加绿色人造玻璃、无色水晶加一层绿色材料加无色水晶等。顶部一般采用祖母绿或绿柱石，下衬有各种不同的绿色材料如人造玻璃、合成祖母绿、色浅的绿柱石等，中间可采用无色或绿色的胶粘接。
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