关键词 白木香;种子;挥发油; GC2MS;抗菌活性
瑞香科白木香Aquila ria sinensis (Lour1) Gilg是生产药用沉香的植物资源,为我国特有的珍贵植物〔1〕。沉香作为名贵的香料和药材自古以来就得到广泛的应用。天然白木香由于长期采伐,资源已经越来越少,现多采自人工种植。白木香树每年产大量种子,近年来随着白木香种植面积的不断扩大,其种子资源日渐丰富。目前白木香种子只有少部分用于育苗,其资源未得到有效开发利用。
长期以来由于抗生素的广泛使用甚至滥用,导致耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin2resistantS taphy lococcus aureus, MRSA) 等耐药菌株的出现。MRSA对临床上广泛应用的多种抗生素耐药,致感染治疗困难,病死率高,已成为全世界范围内抗感染中的难题。因而解决MRSA 耐药性问题已经成为当今医药界的重要任务。本研究组在海南热带药用植物抗MRSA活性筛选过程中,发现白木香种子挥发油显示了一定的抗MRSA活性,并通过GC2MS 技术分析测定了白木香种子挥发油的化学成分。
1 材料与方法
111 材料 白木香种子样品于2006年6月采于文昌沉香种植基地。由中国热带农业科学院热带生物技术研究所戴正福副研究员鉴定。凭证标本(No1 AS200606)存放于中国热带农业科学院热带生物技术研究所。
112 仪器与试剂 气相色谱质谱联用仪为美国惠普公司的HP6890 /5973GC /MS联用仪。色谱柱为HP25MS 5% Phenyl Methyl Siloxane ( 3010 m ×250μm ×0125μm)弹性石英毛细管柱。减压浓缩使用Buchi Rotavapof R2200 旋转蒸发仪; 硫酸卡那霉素(上海生工有限公司) ;氟康唑(贵州科伦药业有限公司,批号: A050314204) ;其他试剂均为分析纯。
113 样品处理 晒干种子样品5716 g,经粉碎后用石油醚浸提三次,每次用超声波提取15 min,合并石油醚提取液,回收石油醚后得到黄色透明油状物1219 g,得率为2215%。
114 GC2MS分析条件 程序升温:柱温50℃,保留1 min, 5℃/min升温至280℃,保持20 min,气化室温度250℃。载气为高纯He ( 991999% ) ;柱前压5108 p si,载气流量210 ml/min;进样量1μl (丙酮溶液) ;分流比40∶1。 离子源为E I源,离子源温度230℃; 四级杆温度150℃;电子能量70 eV;发射电流3416μA;倍增器电压1871 V;接口温度280℃;质量扫描范围为10 ～550 amu。
115 菌株与培养基 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌955(methicillin2resistant S taphylococcus aureus, MR2SA)由中国热带农业科学院热带生物技术研究所保藏;白色念珠菌Cand ida albicans购于海南省药品检验所。MRSA采用牛肉膏蛋白胨培养基〔3〕:牛肉膏3 g,蛋白胨10 g,NaCl 5 g,琼脂20 g,定容至1L, pH710～712, 1 ×105 Pa灭菌20 min;白色念珠菌采用YPD培养基〔4〕:葡萄糖20 g,胰蛋白胨20 g,酵母粉 10 g,琼脂20 g,定容至1L, pH 710, 1 ×105 Pa灭菌20 min。
116 抗菌活性的测定〔5〕 将种子挥发油配成浓度为50 mg/ml的样品溶液,选用直径为6 mm的灭菌滤纸片,滤纸片分别加样品溶液50、60、70μl,每个梯度重复三次,待溶剂挥干后,将已点样的滤纸片贴于已涂供试菌悬液100μl (菌液浓度105 ～107 cfu /ml)的琼脂培养基上,放置20 min后,再放入培养箱37℃无光照培养, 24 h后测其抑菌圈大小。MRSA以硫酸卡那霉素作为阳性对照,白色念珠菌以氟康唑作为阳性对照。
2 结果
211 GC2MS分析结果 通过HPMSD 化学工作站,结果Nist 2005标准质谱图库和W ILEY275质谱图库进行鉴定,采用峰面积归一化法计算相对含量。
分析结果见表1。
从白木香种子挥发油中共检出23个成分,鉴定了其中的19个化合物,含量占总油的87163%。含量最高的为棕榈酸(23161% ) ,较高的有壬二酸双212甲基丙酯( 13176%) 、92氧代2壬酸丁酯( 13102% ) 、92氧代2壬酸乙酯( 4141% ) 、油酸(3158% ) 、亚油酸乙酯(3165% )等。白木香种子挥发油检出有棕榈酸、肉豆蔻酸和油酸等脂肪酸以及2, 42二叔丁基苯酚在沉香药材中也有发现〔6〕。但本次研究中未发现沉香特征性成分,也未发现沉香中常见的倍半萜类成分
212 活性测定结果 以滤纸片琼脂扩散法测定化合物的抗菌活性,结果表明种子挥发油对MRSA有微弱抑制作用,增大挥发油浓度,抑菌圈并未增大(表2) 。对白色念珠菌则没有表现出活性。
3 讨论
近年来海南和广东等地的白木香种植面积不断扩大,每年产大量的种子,其资源未得到有效开发利用。本次研究结果表明白木香种子挥发油具有一定的抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA ) 活性。MRSA对多种抗生素耐药,而且突变速度极快,被称为“超级细菌”,已成为难题。研究结果为白木香种子的开发提供了新的科学依据。
